Multiplexed phát hiện nồng độ protein ERK phosphoryl hóa và tổng số mẫu mô được lấy cho ba bệnh nhân ung thư vú ở người
Liên hệ
Đánh giá:
Nội dung chi tiết:
Các mảng protein là một cách cao hơn, thông lượng để tạo ra thông tin về sự phong phú protein hoặc nhà nước sửa đổi.
Sử dụng IR huỳnh quang để phát hiện các mảng protein của bạn sẽ cung cấp cho bạn:
Giảm đáng kể autofluorescence nền của slide nitrocellulose bọc 1
Độ nhạy sáng trong khoảng femtogram 2
Phạm vi hoạt động rộng
Phát hiện ghép để định lượng và so sánh hai mục tiêu 3
Đơn giản hóa giao thức phát hiện 3
Các loại phổ biến của các mảng protein 4 bao gồm:
Lysate (giai đoạn sau) mảng chứa các mẫu phức tạp, chẳng hạn như tế bào hoặc mô lysates, được in trên bề mặt mảng và thẩm vấn hoặc với kháng thể.Ưu điểm bao gồm:
Định lượng và tái sản xuất hơn so với cao bồi miền Tây (Biến thể nội-chip ~ 0,1% 2)
Phạm vi hoạt động rộng
Bảo tồn các mẫu quý
Rất nhạy cảm - có thể phát hiện femtogram hoặc protein đơn bào cấp 2
Tiêu chuẩn protein tái tổ hợp điểm để định lượng tuyệt đối 2
Chạy nhiều lần nhắc lại, pha loãng một cách dễ dàng
Mảng phân tích sử dụng thuốc thử ái lực như kháng thể hoặc các peptide để cấu chất phân tích trong hỗn hợp phức tạp của các protein.Những mảng có thể được phát hiện trên một chip hoặc slide, hoặc phát hiện vào tấm microwell.Mảng chụp kháng thể là dạng phổ biến nhất.
Ví dụ: mảng Quansys ELISA
Mảng protein chức năng được phát hiện với nhiều protein tinh khiết khác nhau, và được sử dụng để khảo nghiệm các chức năng sinh hóa chẳng hạn như protein-protein, protein-DNA, các tương tác protein-phân tử nhỏ và hoạt động của enzyme.
Hình 2. Độ lặp phát hiện ERK sử dụng thuốc nhuộm hồng ngoại.Lysate đã được chuẩn bị từ một mẫu mô ung thư vú ở người.Nó được dàn trận trong ba lần trong một loạt các độ pha loãng hai lần, và nhuộm với thỏ chống ERK chính Ab và IRDye ® 800CW thuốc nhuộm có nhãn dê chống thỏ.Độ tuyến tính và lặp lại của dữ liệu này được thể hiện trong đồ thị.Mức trung bình của ba lần lặp lại được vẽ;thanh lỗi mới có nhưng rất nhỏ và khó nhìn thấy Phỏng theo Calvert, VS et al.. Clin Prot J 1 (1): 81-89 (2004).