FRET-dập tắt nghiệm protease là một cách định lượng nhanh để đo hoạt động protease
Liên hệ
Đánh giá:
Nội dung chi tiết:
Chất nền còn nguyên vẹn là huỳnh quang dập tắt, hoặc bằng cách tự dập tắt (như thể hiện trong sơ đồ mạch) hoặc bởi một loại thuốc nhuộm thức uống
Cleavage gây ra thuốc nhuộm để tách, làm giảm sự dập tắt và tín hiệu tạo
Không có sự can thiệp từ chất nền uncleaved
Ưu điểm của IRDye xét nghiệm protease:
Tính đơn giản - chỉ cần trộn và đọc
Tính linh động - không có giải pháp ngăn chặn cần thiết;dễ dàng để theo dõi phản ứng theo thời gian
Độ nhạy sáng - phát hiện gần hồng ngoại làm giảm nền, tán xạ và nhiễu gây ra bởi các hợp chất khác 2-3
Subnanomolar phát hiện enzyme 2
Nâng cao cường độ huỳnh quang lớn khi tiêu hóa 4
Thích hợp cho sàng lọc chất ức chế protease, ứng cử viên thuốc IC 50 đo lường và sàng lọc thông cao của hoạt động enzyme
Độ tan trong nước tuyệt vời
Hình 2. Sự ức chế HIV-1 protease bởi Pepstatin A. phân giải protein của cơ chất dập tắt (1 mM) bởi HIV-1 protease (20 nM) bị ức chế bởi việc bổ sung Pepstatin A (4.11 nM đến 9 mM).. Sau 1 giờ ở 37 ° C, các phản ứng đã bị chặn lại và cường độ huỳnh quang của IRDye ® 800CW đo với một hệ thống Aerius Automated Infrared Imaging Trích từ: Bước tiếp theo trong Near Infrared Fluorescence: IRDye QC-1 Dark thức uống LI-COR Biosciences ( 2009)